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【样本要求】
新鲜活检或外科样本组织，参照病理技术规范要求取材、固定、脱水、包埋制成蜡块。组织切片后黏附在防脱玻片上，组
织厚度约为 3~5μm。除去组织切片中的水滴后，放入 60~65°℃恒温箱中加热两个小时，取出冷却至室温。
【检验方法】
1.检验所需仪器、设备
移液器、免疫组化油笔、干燥箱、计时器、孵育盒、染色架、盖玻片、生物显微镜、洗瓶等。
2 试验温度条件:室温
3 试验步骤
a)石蜡切片脱蜡、水化，流水冲洗
b)抗原修复
参照一抗说明书要求，对组织进行相应的抗原修复;
将抗原修复后的切片用流水冲洗 1 分钟，用油笔圈定玻片上的待测组织区域，PBS 溶液冲洗3 分钟x3 次。
c)阻断内源性过氧化物酶
除去 PBS 溶液，在油笔圈定的区域内加内源性过氧化物酶阻断剂(试剂 1)，室温下孵育 10分钟; PBS 溶液冲洗 3 分钟
x3 次。
d)加非特异染色阻断剂
除去 PBS 溶液，加非特异染色阻断剂(试剂 2)，室温下孵育 10 分钟。
e)加抗体
除去非特异染色阻断剂，加一抗，孵育(参照一抗说明书);
PBS 溶液冲洗 3 分钟x3 次。
f)加生物素标记的 IgG 聚合物
除去 PBS 溶液，加生物素标记的羊抗小鼠/兔 IgG 聚合物(试剂 3)，室温下孵育 10 分钟; PBS 溶液冲洗 3 分钟 x3次。
加链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶
除去 PBS 溶液，加链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(试剂 4)，室温下孵育 10 分钟; PBS 溶液冲洗 3 分钟 x3 次。
g)显色
除去 PBS 溶液，加 DAB 显色液或 AEC 显色液，孵育(参照星色液说明书)。
复染
流水冲洗，苏木素复染；
PBS 溶液或流水冲洗返蓝。
h)封片
封片时，若使用 DAB 显色，则切片可经梯度乙醇脱水。二甲苯透明，中性树胶封片:若使用AEC 显色，则切片不可经梯度乙醇脱水，应直接使用水性封片剂封片。
i)生物显微镜阅片
4 结果判断
免疫组化染色结果需由有资质的病理医生在生物显微镜下对染色后切片进行观察并进行判断。
